IgE sérica e IgA salival, total y específica para Dermatophagoides pteronyssinus y subpoblaciones leucocitarias en niños atópicos y no atópicos con asma y/o rinitis / Total and Dermatophagoides pteronyssinus specific IgE and salivary IgA and leukocyte populations in atopic and nonatopic children with asthma and/or rhinitis

Objetivo. Investigar inmunológicamente niños con problemas respiratorios de asma y/o rinitis (atópicos o no atópicos) en la búsqueda de evidencias que permitan una mejor comprensión del desbalance que padecen estos niños en su sistema inmune. Materiales y métodos. Se estudiaron 47 niños de ambos sexos, con edades comprendidas entre los 6 y 15 años, que concurrieron a la consulta por afecciones respiratorias compatibles con asma y/o rinitis a la División de Alergia e Inmunología del Hospital de Niños de la Santísima Trinidad de la Ciudad de Córdoba. Según la información obtenida en la anamnesis, examen físico y prick tests, fueron divididos en dos grupos: atópicos (n=25) y no atópicos (n=22). Luego que los padres firmaron el consentimiento informado y los niños mayores a 7 años dieron su asentimiento para participar del trabajo de investigación, se tomaron muestras de sangre y saliva, para determinar concentración y actividad específica en inmunoglobulinas (Igs) así como estudiar poblaciones leucocitarias y subpoblaciones linfocitarias. Resultados. Como era previsible, los niveles de IgE sérica total y los porcentajes relativos de eosinófilos sanguíneos se mostraron significativamente elevados en el grupo de los niños atópicos (A) con respecto a los no atópicos (NA). El estudio de IgE sérica específica para Dermatophagoides pteronyssinus solo arrojó resultados positivos en los pacientes A y se observó una correlación significativa entre los niveles de IgE total y específica para dicho alérgeno, y entre los niveles de prick y RAST. Los niveles séricos de IgG e IgA no demostraron diferencias de significación entre ambos grupos. El estudio de la IgA salival (IgAs) total permitió observar en el grupo de los niños NA concentraciones significativamente mayores que las correspondientes al grupo de pacientes A. Sin embargo, al estudiar la IgAs específica para el D. pteronyssinus, se observó lo inverso: los pacientes A tienen casi el doble de IgAs específica para el alérgeno respecto del grupo NA. En el estudio de subpoblaciones de células T (CD3, CD4 y CD8), no se observaron diferencias significativas entre ambos grupos. Las subpoblaciones de linfocitos B CD27-y linfocitos B CD27+ tuvieron valores similares en ambos grupos (aproximadamente 80% y 20%, respectivamente). En ambos grupos, alrededor de un 50% de los linfocitos B CD27+ expresaron IgD y el 50% restante fueron IgD­. Sin embargo, el grupo de niños A tuvo dos veces menos de linfocitos B que expresan alta densidad de la molécula CD27 (CD27+++) con respecto a los niños NA (p=0,044). Conclusión. Entre los parámetros inmunológicos investigados encontramos diferencias significativas entre niños A y NA en las concentraciones totales y específicas para el D. pteronyssinus en los isotipos de IgE e IgAs, y en una subpoblación de linfocitos B CD27+++. Dichos hallazgos son analizados en la discusión del manuscrito. (AU)

Purpose. To perform an immunologically investigation in children with respiratory problems of asthma and/or rhinitis (atopic or non atopic) in order to get a better understanding of the immune system imbalance in these patients. Materials and methods. 47 children of both sexes, aged between 6 and 15 years, who were attended for respiratory diseases at the Division of Allergy and Immunology at Children's Hospital de la Santísima Trinidad from Córdoba city were studied. According to information obtained on clinical history, physical examination and prick tests they were divided into two groups: Atopics (n=25) and non-atopic (n=22). After parents signed informed consent and children over 7 years assent to participate in the research work, samples of blood and saliva were taken to determine immune globulins concentrations and specific activities as well as to study leukocyte populations and lymphocytes subpopulations. Results. As expected, levels of total serum IgE and the relative percentages of blood eosinophils were significantly higher in the group of atopic (A) children with regard to non¬atopic (NA) children. The study of specific serum IgE for Dermatophagoides pteronissynus only showed positive results in the A group, and positive correlations between the levels of total and specific IgE, as well as prick and RAST values. Serum IgG and IgA levels showed no significant differences between both groups. Total salivary IgA concentrations were significantly higher in the group of NA children than in the group of A patients. Surprisingly, when specific salivary IgA for D. pteronyssinus was studied, the opposite was observed: Atopic patients have nearly twice specific salivary IgA for this allergen than the NA children. In the study of T cells subpopulations (CD3, CD4 and CD8), no significant differences between groups were observed. The subpopulations of CD27-B cells and CD27+ B cells were similar in both groups (roughly 80% and 20%, respectively). In both groups, approximately 50% of CD27+ B cells expressed IgD and the remaining 50% were IgD­. However, atopic children had less than half B cells expressing high density of CD27 molecule (CD27+++) with respect to the NA children (p=0.044). Conclusion: Among the immunological parameters investigated, we found significant differences between A and NA children in the concentrations of total and specific IgE and salivary IgA to the allergen, and in a subpopulation of CD27+++ B cells. These findings are debated in the discussion of the manuscript(AU)

Estudio del polimorfismo del gen de TNF-α, de dicha citocina, y de MCP-1 en pacientes con queratopatía climática esferoidea / Studies of TNF-α gene polymorphism, TNF-α and MCP-1 cytokines in patients with spheroidal climatic keratopathy

Objetivo. Investigar polimorfismo de nucleótidos únicos (SNP) en la posición -308 (G/A) del gen TNF-α y la participación de las citocinas TNF-α y MCP-1 en pacientes con queratopatía climática esferoidea (QCE) y en controles sanos. Materiales y métodos. Participaron 15 pacientes con QCE y 15 individuos sanos del departamento El Cuy, Provincia de Río Negro. Todos ellos, luego de firmar el consentimiento informado, recibieron un examen oftalmológico completo y se recolectaron muestras de sangre y lágrima para realizar diferentes estudios. EL ADN genómico fue obtenido de sangre de todos los individuos mediante el método de salting out y posteriormente amplificado y estudiado mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con el sistema de amplificación refractaria a la mutación (ARMS). También se investigaron concentraciones de algunas citocinas proinflamatorias en lágrimas y en sobrenadante de cultivo de células epiteliales corneales humanas (CECH) tratadas o no con radiación ultravioleta B (RUV-B). Resultados. Los resultados de SNP en la posición -308 (G/A) del gen TNF-α (frecuencia alélica y genotípica) indicaron ausencia de diferencias significativas entre pacientes y controles sanos. Fenotípicamente ambos grupos de individuos serían bajos o intermedios productores in vitro de la citocina TNF-α. Sin embargo en las lágrimas de pacientes con QCE se detectaron concentraciones significativamente superiores de TNF-α, IL-1ß y MCP-1 (citocinas proinflamatorias) que en lágrimas de individuos controles sanos (p<0,0001) En la periferia y limbo de la córnea las células dendríticas (CD) incrementaron significativamente con el progreso de la enfermedad (p<0,05). La contribución del epitelio corneal en el proceso inflamatorio fue investigada utilizando CECH expuestas o no a 10 mJ/cm2 de RUV-B. A pesar de la presencia de gelatinasas, IL-6 e IL-8 en sobrenadantes de cultivos obtenidos a las 48 horas (datos no mostrados) no observamos niveles detectables de TNF-α, IL-1ß ni MCP-1. Conclusión. Este trabajo aporta nuevos datos para aumentar los conocimientos sobre los mecanismos inmunológicos involucrados en la etiopatogenia y progresión de la QCE. Demostramos que las citocinas proinflamatorias MCP-1 y TNF-α están significativamente elevadas en lágrimas de individuos con QCE, como se observó previamente con IL-1ß. MCP-1 sería la responsable del aumento de CD en córnea periférica y limbo de estos pacientes a medida de que la enfermedad avanza. El hallazgo de que estas citocinas no pudieron ser detectadas en cultivos de CECH estresadas con RUV-B implica que otras células son las responsables de su producción o que además de RUV-B otros factores son necesarios para iniciar esta cascada de eventos que se observan en esta hipersensibilidad corneal humana(AU)

Purpose. To investigate Single Nucleotide Polymorphism (SNP) at -308 position (G/A) of TNF-α gen and involving of TNF-α and MCP-1 cytokines in Climatic Droplet Keratopathy (CDK) patients and healthy controls. Materials and methods. Fifteen patients with CDK and fifteen healthy controls from departamento El Cuy, province of Rio Negro were involved in this study. After informed consent was obtained from all participants, they had a complete eye examination and then tear and blood samples were collected to perform different assays. DNA was obtained from blood of all individuals using the method of "salting out" and then amplified and studied performing the polymerase chain reaction (PCR) with Amplification-refractory Mutation System (ARMS). Furthermore, some cytokines concentrations were measured in tears and supernatants from human corneal epithelial cells (HCEs) exposed or not to UVR-B radiation. Results. Analysis from SNP at position -308 (G/A) of TNF-α gen (allelic and genotypic frequency) showed no significant differences between patients and healthy controls. Phenotypically both groups of individuals would be low or intermediate in vitro producers of TNF-α cytokine. However, in tears from CDK's patients we detected significantly higher concentrations of TNF-α, IL-1ß and MCP-1 (pro-inflammatory cytokines) than in healthy control subjects tears (p<0.0001). At the corneal peripheral / limbus area, dendritic cells (DCs) increased significantly with the progression of the disease (p<0.05). The corneal epithelium contribution to the inflammatory process was investigated using HCEs exposed or not to 10 mJ/cm2 of UV radiation­B (UVR-B). Despite the presence of gelatinases, IL-6 and IL-8 in culture supernatants obtained after 48 hours (data not shown), detectable levels of TNF-α, IL-1ß and MCP-1 were not detected. Conclusion. This study provides new insights to increase our knowledge about the immunological mechanisms involved in the etiopathogenesis and progression of CDK. We showed that pro-inflammatory cytokines MCP-1 y TNF-α were significantly increased in tears from CDK's patients, as previously described with IL-1ß. MCP-1 would be responsible for the increasing of DCs on the corneal peripheral / limbus area of these subjects as the disease progresses. The fact that these cytokines could not be detected in cultures of HCEs stressed with UVR-B implies that other cells are responsible for their production or, in addition to UVR-B, other factors are necessary to initiate the cascade of events observed in this human corneal hypersensitivity. (AU)

Cavidad oral: importante sitio de vigilancia inmunológica / Oral cavity: important site for immune surveillance

La cavidad oral es el principio del tracto digestivo y uno de los sitios del cuerpo más expuestos al ingreso de todo tipo de patógenos, tanto del aire como de los alimentos. Aunque varios excelentes artículos han examinado distintos aspectos de tejidos linfoides asociados a mucosas (MALT), no hay suficiente información acerca de la respuesta inmune en la cavidad oral. En esta revisión destacamos algunos aspectos sobre la anatomía / histología de la cavidad oral, estructuras asociadas y células o moléculas con crucial función inmunológica contra antígenos que ingresan en la boca. Los estudios sobre la mucosa oral han adquirido mucha notoriedad últimamente debido a que ofrece una excelente accesibilidad y evita la degradación de las proteínas y péptidos. En la cavidad bucal se puede generar una respuesta inmune apropiada contra microorganismos, en donde además de la IgA salival muchas otras moléculas son liberadas y cumplen un rol protagónico. A pesar de todos estos factores de defensa, existen momentos en donde el individuo se encuentra más expuesto, dependiendo de la edad, factores hormonales, genéticos, hábitos de fumar y la actividad física, ya que todo esto modifica la tasa de flujo salival, tasa de secreción y concentración de IgA salival y demás proteínas. (AU)

The oral cavity is the beginning of the digestive tract and one of the most exposed body sites to the entry of all types of pathogens in the air as food. Although several excellent articles have examined various aspects of mucosa-associated lymphoid tissue (MALT), there is insufficient information about the oral cavity immune response. In this review we highlight some aspects of the anatomy / histology of the oral cavity, associated structures and cells or molecules with crucial immunological function against antigens that enter the mouth. Studies on the oral mucosa have gained much notoriety lately because it offers excellent accessibility and prevents the degradation of proteins and peptides. In the oral cavity can generate an appropriate immune response against microorganisms, where salivary IgA in addition to many other molecules are released and play a role. Despite these defense factors, there are moments where the individual is more exposed, depending on age, hormonal factors, genetic, smoking habits and physical activity, and that this changes the rate of salivary flow rate secretion and concentration of salivary IgA and other proteins.(AU)

Participación de componentes inmunológicos en la etiopatogenia de la queratopatía climática esferoidea / Involvement of immune components in the etiopathogenia of climatic droplet keratopathy

Objetivo. Investigar si componentes de la inmunidad innata están involucrados en la iniciación/perpetuación de las anormalidades estructurales observadas en la capa de Bowman y el estroma superficial de la córnea de pacientes con queratopatía climática esferoidea (QCE). Materiales y métodos. En el estudio participaron 8 pacientes con QCE y 12 individuos sanos del Departamento El Cuy, Provincia de Río Negro, y 10 individuos sanos de la ciudad de Córdoba. Todos ellos, luego de firmar el consentimiento informado, recibieron un examen oftalmológico completo y se recolectaron muestras de lágrima para estudiar las concentraciones de diferentes citocinas, niveles y formas de metaloproteinasas de matriz (MMPs), y el inhibidor natural de MMPs (TIMP-1). Se realizó microscopía confocal in vivo (MCF) en algunos pacientes y controles. Biopsias de córneas provenientes de pacientes que fueron tratados con queratoplastia penetrante también fueron estudiadas mediante inmunohistoquímica (IHQ). Resultados. Los resultados de MCF indicaron claramente una progresión en la cantidad de depósitos a nivel subepitelial, a medida que la enfermedad avanza. El daño progresivo de las fibras nerviosas sub basales y estromales en los estadios 2 y 3 se correlaciona con pérdida de la sensibilidad corneal. Además de estas alteraciones, observamos que el número de células dendríticas (CD) en el limbo corneal aumentó significativamente a medida que la QCE progresa. En lágrimas de pacientes con QCE se detectaron concentraciones significativamente superiores de citocinas proinflamatorias (IL1ß e IL-8) que en individuos controles (p<0,005). No se halló IL-2, IL-17, IL-4, IL-13 ni IL-10 en pacientes y ni controles. Las actividades de gelatinasas (MMP-9 y -2) fueron significativamente mayores en QCE que en los controles (p<0,001), mientras que los niveles de TIMP-1 fueron significativamente menores en los pacientes (p<0,05). La concentración de MMP-8 fue mayor en controles pero los niveles de esta colagenasa-2 fueron 30 veces superiores, tanto en QCE como controles, con respecto a los valores de los individuos de un centro urbano. Mediante IHC observamos reactividad para MMP-9 en la mayoría de las células epiteliales, solamente en córneas con QCE. Conclusión. Demostramos un rol protagónico del eje citocinas proinflamatorias - gela-tinasas en el desarrollo de la QCE. Los altos niveles de IL-1ß e IL-8 en lágrimas de pacientes facilitan la producción de MMP-8 y gelatinasas, y los efectos de las mismas se exacerban, ya que los pacientes tienen bajos niveles de sus inhibidores naturales (TIMP-1). La MMP-9, además de degradar componentes de la matriz extracelular, cataliza la activación postranscripcional de IL-1ß, potenciando el proceso inflamatorio. Estos resultados son los primeros en explicar mecanismos inmunológicos involucrados en la etiopatogénesis de la QCE y aportan nuevas alternativas para el desarrollo de terapias preventivas utilizando inhibidores de IL-1ß y/o gelatinasas(AU)

Objective. To investigate whether components of innate immunity are involved in the initiation / perpetuation of the structural abnormalities observed in Bowman's layer and superficial stroma of the córnea of patients with Climatic droplet keratopathy (CDK). Materials and Methods. The study included 8 CDK patients and 12 healthy individuals from Department El Cuy, Province of Río Negro, and 10 healthy subjects from the city of Córdoba. All of them, after signing informed consent, received a thorough eye exam and tear samples were collected to study the concentrations of different cytokines, and levels and forms of matrix metalloproteinases (MMPs) and their natural inhibitor (TIMP-1). In vivo confocal microscopy (CFM) was performed in some patients and controls. Corneal biopsies from CDK patients treated with penetrating keratoplasty were also studied by immunohistochemistry (IHC). Results. CFM results clearly indicated a progression in the amount of deposits at corneal sub epithelial level as the disease progresses. The progressive damage in the nerve plexus in stages 2 and 3 correlated with a loss of corneal sensitivity. In addition to these alterations, we observed that the number of dendritic cells (DC) in the limbus increased significantly as the disease progresses.In tears of patients with CDK we detected significantly higher concentrations of pro-inflammatory cytokines (IL-1ß and IL-8) than in control subjects (p < 0.005). We found no IL-2, IL-17, IL-4, IL-13 and IL-10 in patients and controls. The activities of gelatinases (MMP-9 and -2) were significantly higher in CDK than in controls (p < 0.001), while TIMP-1 levels were significantly lower in patients (p < 0.05). The concentration of MMP-8 was higher in controls, but levels of this collagenase-2 were 30 times higher, both in CDK and controls, with respect to MMP-8 values of individuals inhabiting an urban area. By IHC we observed reactivity for MMP-9 in most epithelial cells only in CDK corneas. Conclussion. We demonstrated a key role of the axis pro-inflammatory cytokines ­ gelatinases in the development of CDK. High levels of IL-1ß and IL-8 in tears of patients facilitate the production of MMP-8 and gelatinases, and the effects of these molecules are exacerbated because patients have low levels of their natural inhibitors (TIMP-1). Since MMP-9 besides degrading extracellular matrix components, catalyzes the post translational activation of IL-1ß, the inflammatory process is fuelled. These results are the first to explain immunological mechanisms involved in the pathogenesis of the QCE and provide new alternatives for the development of preventive therapies using inhibitors of IL-1ß and / or gelatinases.(AU)